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RNA提取（TRlzol提取法）
1．取样 ，研磨（组织）： 迅速取出组织样本 ，在电子天平中称重约0.3-0.5 g（也可根据实际经验估测取样量），放入液氮预冷的研钵中，边研磨边加液氮 ，整个过程都不要使组织融化 。
2．裂解：
（1）组织：按每100
mg组织加入1 mL TRIzol ，继续研磨至较细粉末，将组织裂解液转移到1.5 mL 离心管中 ，每管约1 mL ，室温放置15min以上；也可直接将研磨的较细粉末用枪头刮入已取好的含有1 mL TRIzol的1.5 mL 离心管中，4℃放置10 min ，或室温放置15min以上；
（2）细胞：（悬浮细胞需预处理：4℃ ，3000
rpm，离心10 min ，收集细胞沉淀于1.5 mL 离心管底）；弃去培养液 ，加入适量1xPBS洗一次，弃去1xPBS ，加入1 mL
TRIzol试剂（TRIzol加入量基于细胞数（1 mL/ 0.5-1x107个）或培养瓶的面积（1 mL/10?cm2） ，用移液器轻吹打几次，超净台中室温放置15 min以上，转移1 mL 液体到1.5 mL 离心管中 。
（3）若不马上进行提取 ，可放入－80℃冰箱中冻存。
3．抽提： 按0.2 mL 氯仿/ 1 mL TRIzol的比例加入氯仿 ，vortex 30 sec或用手剧烈摇动15 sec，室温放置2-3 min后 ，
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评论列表（4条）
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