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RNA提取(TRlzol提取法)
1.取样 ,研磨(组织): 迅速取出组织样本,在电子天平中称重约0.3-0.5 g(也可根据实际经验估测取样量),放入液氮预冷的研钵中,边研磨边加液氮 ,整个过程都不要使组织融化 。
2.裂解:
(1)组织:按每100
mg组织加入1 mL TRIzol,继续研磨至较细粉末,将组织裂解液转移到1.5 mL 离心管中 ,每管约1 mL,室温放置15min以上;也可直接将研磨的较细粉末用枪头刮入已取好的含有1 mL TRIzol的1.5 mL 离心管中,4℃放置10 min ,或室温放置15min以上;
(2)细胞:(悬浮细胞需预处理:4℃,3000
rpm,离心10 min ,收集细胞沉淀于1.5 mL 离心管底);弃去培养液,加入适量1xPBS洗一次,弃去1xPBS ,加入1 mL
TRIzol试剂(TRIzol加入量基于细胞数(1 mL/ 0.5-1x107个)或培养瓶的面积(1 mL/10?cm2),用移液器轻吹打几次,超净台中室温放置15 min以上,转移1 mL 液体到1.5 mL 离心管中。
(3)若不马上进行提取 ,可放入-80℃冰箱中冻存。
3.抽提: 按0.2 mL 氯仿/ 1 mL TRIzol的比例加入氯仿,vortex 30 sec或用手剧烈摇动15 sec,室温放置2-3 min后 ,
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评论列表(4条)
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