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染料法一般使用的是SYBR Green I染料,这是一种可以与双链DNA小沟结合的荧光染料,不会与单链DNA结合 ,并且在游离状态下几乎无荧光,只有与双链DNA结合才会发出荧光,因此将PCR扩增产生的双链DNA数量与荧光强度直接关联 ,产生实时监测的效果。
2.? 基于探针的化学法
原理: 应用一个或多个荧光标记的寡核苷酸探针检测PCR扩增产物;依赖荧光能量共振传递检测特异性扩增产物 。
应用于核酸定量、基因表达验证 、等位基因鉴别、SNP分型、病原体和病毒检测 、多重PCR。
优缺点: 探针法的鉴别能力远远大于DNA结合染料法,因为它们只与目的产物结合,从不与引物二聚体或其他非特异产物结合,缺点是它的合成价格高。
探针法中最常用的TaqMan探针是一种寡核苷酸探针 ,荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭基团
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